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高效液相色譜儀范文1

[關鍵詞]安捷倫 高效液相色譜儀 日常維護 期間核查

中圖分類號：TS206.2 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2016）21-0088-01

引言

高效液相色譜儀（HPLC）的靈敏度高、分辨率高、色譜柱支持反復利用、運行效率高、速度快、流出組收集難度低，是當前我國實驗室內使用范圍較廣的一種分析型儀器。如今，在大氣環境分析、無機分析、生物醫藥研究、食品檢測等領域，高效液相色譜儀都得到了應用。

安捷倫高效液相色譜儀的出現，使HPLC的壓力上限得到了提升，四元泵、等度泵、二元泵系統的壓力上限均可達到600bar，其最高流速多達5mL/min。其中，四元泵系統與等度泵系統的壓力上限在達到200 bar時，其流速為10mL/min，檢測速率為80 Hz，靈敏度為原先的十倍，大大提高了安捷倫的通用性，促使安捷倫的分離速度上升了一個臺階。

1 安捷倫高效液相色譜儀的環境要求

為了保持儀器的正常運行，延長儀器的使用壽命，環境必須保持干凈、電壓穩定、遠離水源。我們應避免在溫度和濕度的急劇變化，一般溫度保持在1530℃，濕度30% - 80%。高效液相色譜法是最常用的有機溶劑，如甲醇，有揮發性并且有毒性，并應配備通風設備。

2 安捷倫高效液相色譜儀的開機維護

首先，檢查檢測過程中用到的色譜柱與流動相的準確性，緊接著將儀器的穩壓電源打開，然后打開柱箱與輸液泵，待色譜柱的最大保護柱壓設置好后開始排氣，保證流路過程中沒有氣泡產生。若有氣泡存在，氣泡內的氧氣會對儀器組件發生氧化作用，導致機器的性能指標受到影響。其次，在控制流速的過程中，應遵循由慢到快的過程，如此可對色譜柱起到更佳的保護效果。再者，要認真觀察柱壓和流速是否可以合理與平穩地增加，等到流速已達到所需值且柱壓處于穩定狀態后，促使檢測器工作，如此即可有助于檢測器的使用壽命增加。

3 高壓輸液泵的維護

整個液相系統能否通暢、壓力是否穩定、流量是否準確主要取決于輸液泵。若壓力的跳動幅度大、流量的精準度不高，會導致基線的變幅增大，噪音擴大，最終使檢驗最終結果與實際出現偏離。為此，要采用HPLC級別的流動相，運用0.45μm濾膜進行過濾。①流動相使用前須脫氣，避免給在線脫氣機太大的壓力。定期更換流動相，避免水溶液滋生藻類或微生物。②要注意更換濾芯，在排氣泡的時候，水相以5 ml/min的流速，壓力超過10 bar就要更換濾芯。③配制10%異丙醇溶液，清洗柱塞清洗附件。調節其打開周期，讓泵里充滿異丙醇溶液，防止鹽析出。④清洗更換溶劑人口過濾頭，如果是玻璃材質的，不能用超聲清洗，只能用30%的硝酸溶液浸泡，定期更換。

4 色譜柱的柱前柱后維護

色譜柱屬于消耗品，所以購置到的色譜柱的廠家與儀器的廠家不同的情況很普遍。實際上，不同廠家的管線接頭也許會和柱頭之間存在偏差的可能。因此，在購置色譜柱的過程中，要謹慎行事，嚴格依據儀器接頭購置柱頭與其相符的色譜柱。

使用流動相前千萬注意，流動相與色譜柱內的保存溶劑和系統內存留溶劑的混溶性，避免形成乳化小液滴，從而毀壞柱子?？梢允褂卯惐甲鳛檫^渡溶劑，實驗室應配備有色譜純的異丙醇作為過渡溶劑，或用于清洗備件。在使用中應當注意，過濾是非常重要的環節，有效過濾才能夠有效保護色譜柱、儀器。為了避免這種情況，不能使用已經存放日期過長的蒸餾水及磷酸鹽溶液，如果條件許可的話，可以采用“在溶液中加入0.0001-0.001M的疊氮化鈉”的方法來處理解決。也可以在溶劑瓶內溶劑的上方不斷地吹入比較穩定的氬氣從而實現隔絕空氣的目的。另外，切忌將溶劑瓶放置于光線強烈的環境下，否則會使溶液本身的效用喪失。同時，為了減輕陽光對容積瓶的影響，應盡可能地運用琥珀色的溶劑瓶進行防治。當然，也可采取把保護柱安裝于色譜柱之前的方式，以防色譜柱受到污染。此外，要定期用水對全部通道進行沖洗，確保閥口上的鹽沉淀被及時清除。

鑒于在日常分析檢測過程中的對象大部分是復雜的混合物，但色譜柱的內腔容積與填料相當小，考慮到色譜柱的使用時間有限，因此通常會在柱前應用保護柱，通過0.45μm的濾膜后才能使用樣品，并定期更換保護柱芯。待樣品做好后，清洗干凈流路與柱子，確保其清潔度達到要求。為節省光源，增加燈的使用年限，應關閉檢測器開關，然后選取5%的甲醇與95%的水對流路內的鹽進行沖洗，緊接著用5%的水與95%的甲醇繼續進行沖洗，待其使整個系統達到充盈狀態。色譜柱首先選擇50%的乙睛水將殘留物清除，然后用純乙睛充滿整個柱子。

5 期間核查

試劑：山梨酸標準溶液；

檢測條件：色柱：Hypersil ODS， 5 EA.m， 4.6 mm×150 mm；流速：1.0 mL/min；

流動相：甲醇、乙酸錢溶液（（ 0.02 mol/L ） （ 5：95，VIV）；

檢測器：二極管陣列檢測器，紫外檢測器，波長230 nm。

6 評定結果

6.1 技術要求

①通過六次測量后，得到的定性測量重復性誤差，RSD定性為1.5%。②定量測量重復性誤差（6次測量）RSD定量為3.0%。③回收率（6次測量濃度的平均值與標準液濃度）大約處在90%至110%的范圍內。

6.2 液相色譜儀期間核查記錄表

選擇以濃度值是20μg/mL的山梨酸為標準物，進樣量是10μL，波長是230 nm，甲醇為其流動相：乙酸錢溶液（0.02 mol/L）（5：95，V/V），流量是1mL/min，下表1為液相色譜儀期間核查記錄表。

6.3 核查結論

通過對儀器設備的使用期間的驗證，以滿足實驗工作的要求，保證實驗結果的準確性，試驗檢定的有效期內可以繼續使用。

7 安捷倫高效液相色譜儀關機維護

做完實驗后，需立馬清洗色譜柱，確保色譜柱干凈。首先，要關閉檢測器的開關，以節省光源，延長儀器燈的使用時間。同時，將檢測器和色譜柱的連接程序全部切斷，從而避免對檢測池形成不利影響。運用流動相對流路進行長達半個多小時的沖洗，緊接著用15%的甲醇水洗大約10min，再用純甲醇沖大概30min，運用純化水對外流路等處進行沖洗。輸液泵的流速減至0時，才可將穩壓器與泵關閉。若把柱子徹底地浸泡在有機相中放置的話，可以有效防止純有機相封存反相色譜柱。

參考文獻：

[1]王媚.高效液相色譜儀的日常維護及常見故障[J].現代婦女（下旬），2014，11：494.

[2]胡大方，王海波. 高效液相色譜儀期間核查方法研究[J].中國獸藥雜志，2005，11：18-19.

高效液相色譜儀范文2

關鍵詞：高效液相色譜儀自動進樣器校準方法；不確定評定；測量方法

一、高效液相色譜儀自動進樣器校準方法

1.高效液相色譜儀自動進樣器校準方法的引進條件

眾所周知，測量始終是分析某物質不可避開的方法，并且也是確定物質各項指標是否合格，以及各成分，還有個成分之間如何發生反應以及之后的各項指標的重要方法，但是單一的測量方法存在著很多的不足之處，而在測量之中任何一點小的紕漏都有可能造成最后的巨大損失，所以在現實的嚴峻條件之下，為了更好更全面地發揮測量的效果和應有的準確度，引進了高效液相色譜儀自動進樣器校準方法。在此之前，國際標準化組織（ISO）曾于1993了《測量不確定度表示指南》，這樣的標準曾是國際上用于測評物品的最低準則，而高效液相色譜儀自動進樣器校準方法也是在嚴格依據指南上的說明來進行創造發明的方法，也正是因為這樣的標準使得高效液相色譜儀自動進樣器校準方法在起點之處的效果就高于普通的校準方法。此外，國家質量技術監督局也曾于1999年批準頒布過JJF1059-1999《測量不確定度評定與表示》。而這之中德CNAL/AC01∶2005《檢測和校準實驗室認可準則》（等同于ISO/IEC17025∶2005）中5.4.6對有關不確定測量的相關方法進行了明確的規定，包括對實驗室中應有的用于測量的設備配套設施，還有在測量之中應該遵循的程序守則。也正是因為這種測量效果的有效性和權威性，在基本的測量方法被普及之后，各大報告中均要求在最后提交的時候附上關于高效液相色譜儀自動進樣器校準方法及不確定評定的評價結果，舉一個明顯的例子，在參加能力驗證和比對中，就要求附上不確定評定的最后結果。

2.高效液相色譜儀自動進樣器校準方法的具體操作原理

高效液相色譜儀自動進樣器校準方法一般采用的方法，是根據液體的最小濃度來進行差量檢測，而根據國家的的對于液體的最新研究顯示，液體中的濃度的測量時液體中最敏感的地方，其敏感度超過了所有的其他指標，是能夠準確得出測量結果的標桿，也因此成為了測量的最重要的指標之一。在測量中，利用高效液相色譜儀自動進樣器校準方法來進行基本的測量，然后再通過對測量的結果進行分析合成，就能得到初步的結果。試驗條件之下對液體的最小濃度的檢測，在達到了一個極點之后，整體上就會成為一個飽和的狀態，在這種飽和狀態之下的液體很難檢測出所想要的數據和效果，所以在液體到達飽和狀態之前就必須要能夠測量出有效地的結果，這就對測量的時間效應有了嚴格的要求，而高效液相色譜儀自動進樣器的優勢之一就是其對時間的把握度能夠高于普通的儀器，這樣不僅能夠節省相應的時間，也能夠在保證試驗效果的同時，盡量避免對檢測物品的浪費，（因為一旦物品至于空氣之下，則會很開與空氣產生化學反應，在這樣的化學反應之下，不僅是液體的純度會發生變化，需要檢測到的液體的相關數據也會因為化學反應產生質的變化，這樣便會導致最后的測量結果出現差錯）

除此之外，最新發表的歐洲《質量控制文件》中也提供了具體的供高效液相色譜儀自動進樣器校準方法如何操作和具體的流程做出了詳細的解釋和說明。在參考控制文件之中，提出了通過高效液相色譜儀自動進樣器校準方法在進行測量的時候，應該對被檢測的液體的體積，殘體，密度等進行具體的測量，而在測量之后還應該進行至少5次以上的重復測量，在這樣的測量結束之后，建立相關的體積誤差，殘液留樣的數據分析對比，并且通過重復性檢測建立復式校準方法，最后保證經評定之后的效果進樣體積誤差的相對擴展不確定度為1.8%。通過具體的標準對檢測結果進行限定，不僅能夠提高檢測的效率，還能減少成本的使用你，是一個利益雙得的兩全之法，同時這樣的檢測結果標準規定也是為之后的高效液相色譜儀自動進樣器的校準進行其他類似的校準時準去的依據保證和方法經驗的提供。

二、高效液相色譜儀自動進樣器校準方法及不確定度評定的具體效果演示說明

1.測量果凍中環己基氨基磺酸鈉中對高效液相色譜儀自動進樣器校準方法及不確定度評定的使用

環已基氨基磺酸鈉俗稱甜蜜素，是一種人工合成的無營養性食品甜味劑。因長期存在甜蜜素是否具致癌性的爭議，英國、美國、歐盟、加拿大等國家和地區的食品中甜蜜素的添加均規定了允許的含量，日本則不允許使用。近年來，我國也將甜蜜素列入為限制使用的食品添加劑。它的基本性質效果是能夠在水中微溶，但是在甲醇、乙醇、氯仿或二氯甲烷等強酸性物質中幾乎不溶。適當的使用中環己基氨基磺酸鈉可以達到對產品增味的效果，但是一旦使用過量，就可能會造成嚴重的急性過敏反應，或者是嚴重的腹瀉，更甚者甚至會威脅人的生命安全，雖然現代醫療技術已經找到相應的方法能夠及時處理這樣的情況，但是如果一旦事情發生的太過于迅速或者用量過大，就很難能夠避免意外情況的發生，因此，對環己基氨基磺酸鈉應該在果凍中使用多少何其的具體效果和可能出現的情況進行測量就有了戰略性的意義。

2.測定果凍中環己基氨基磺酸鈉中使用的具體參數

檢測中所需要的化學數據建立在基本的數學模型之上，而使用到的基本公式就是

CX = × ×100% （1）

式中：CX――供試品的含量；

AR――對照品的峰面積

AX――供試品的峰面積

WR――對照品濃度（g）

WX――供試品濃度（g）

這個基本的公式適用于計算產品中檢測出的結果時的對具體的產品數據進行分析的時候使用，是在檢測之后需要用到的工具。

檢測之前需要用到的工具包括電子天平，特定的試管若干，同時還應該注意的是對室內溫度的控制，一般在二十五攝氏度左右，同時控制液體在液箱中的流速大概為1.0ml/min ，在做好了基本的設施準備之后，應該注意的就是在實驗過程中進行數據的準確計量。在實驗中會用到的數據一般有：波長，樣品和對照樣品的量度，樣品和對照樣品的濃度，兩種樣品的平均峰面，對照樣品的實際濃度和在摻水之后的產品變量的濃度，供應品的含量，其中對對照品純度的控制要在：99.5%以內 ；對樣品中含水量的控制要在：4.9%以內。在計算之后，除了基本的檢查核算以確保測量的結果無誤，還應該進行合成標準不確定度的計算，一般來說這樣的計算主要是為了計算重度，舉一個簡單的例子，在各項條件符合標準的狀況下，合成標準不確定度的計算結果應該是類似于下面的結果：

uc（Cx）=

= =0.021

uc（CX）=100.41%×0.021=2.1%

最后，在計算結果的基礎上擴展不確定度計算，在進行完最后一步之后，按照標準流程提交報告。

參考文獻：

[1]王冠杰，季士委，田利，曹守春，鄒健，楊洋.高效液相色譜儀自動進樣器校準方法及不確定度評定[J].化學分析計量，2013，05：69-71.

高效液相色譜儀范文3

【關鍵詞】 仔花感冒膠囊；對乙酰氨基酚；高效液相色譜法

Abstract：Objective To establish a method for the determination of Paracetamol in Zihua Ganmao Capsule. Method Samples were separated on a Kromasil-C18 column with the mobile phase of methanol- water (35∶65)， and the detection wavelength was set at 249 nm. Result The calibration curves were linear in the range of 0.165～0.99 μg (r＝0.999 9) for Paracetamol. The average recovery was 98.41% and RSD＝ 0.64% (n＝6). Conclusion The method is accurate and repeatable， and can be used for the quality control of Zihua Ganmao Capsule.

Key words：Zihua Ganmao Capsule；Paracetamol；HPLC

仔花感冒膠囊由狗仔花、柴胡、藁本、防風、黃芩以及馬來酸氯苯那敏、對乙酰氨基酚等制成，具有清熱解毒、祛風止痛的功效，用于風熱感冒所見發燒頭痛、肢體不適。對乙酰氨基酚為其中的主要西藥成分之一，原質量標準中用紫外分光光度法[1]測定對乙酰氨基酚的含量，重現性差、陰性干擾嚴重、誤差較大。為了更好地控制該藥的質量，筆者采用高效液相色譜法測定對乙酰氨基酚的含量，方法簡便、結果準確、重復性好，可以較好地控制該產品的質量。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：日本島津LC-10AD泵，SPD-10AV紫外檢測器，C-R7Ae數據處理機；超聲波清洗器[必能信超聲(上海)有限公司]。對乙酰氨基酚(中國藥品生物制品檢定所提供，批號10018-200408，供含量測定用)；仔花感冒膠囊(廣西玉林制藥有限責任公司提供，批號635002、635003、635004、735001、735002)。甲醇為色譜純，其他為分析純、水為去離子水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(35∶65)，流速：0.5 mL/min，柱溫：30 ℃，檢測波長：249 nm，進樣量10 μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取在105 ℃干燥至恒重的對乙酰氨基酚適量，加甲醇制成每1 mL含50 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20粒的內容物，精密稱定，研細，混勻，取約0.3 g，精密稱定。加甲醇35 mL，超聲處理(功率500 w，頻率50 kHz) 20 min，放冷，濾過，濾液置50 mL量瓶中，用少量甲醇分次洗滌容器和殘渣，洗液濾入同一量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取1 mL置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.4 線性關系考察

精密稱取在105 ℃干燥至恒重的對乙酰氨基酚適量，加甲醇制成每1 mL含0.165 mg的溶液作為對照品溶液。精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5、6 mL，分別置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，各精密吸取10 μL，分別注入液相色譜儀，依本法測定。以測得峰面積為縱坐標，對照品進樣量(μg)為橫坐標，繪制標準曲線，求得線性回歸方程：Y＝3 450 864X－9 698，r＝0.999 9(n＝6)，表明對乙酰氨基酚進樣量在0.165～0.99 μg范圍內呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

取同一份供試品溶液，依本法，按上述色譜條件測定，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，重復進樣6次，對乙酰氨基酚峰面積的RSD＝0.55%，結果表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

吸取供試品溶液10 μL，于0、1、4、8、12、24 h，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，結果對乙酰氨基酚峰面積RSD＝1.6%，說明供試品溶液在24 h內穩定。

2.7 重復性試驗

取同一批號(批號635003)的仔花感冒膠囊樣品5份，按供試品溶液制備項下操作，制備5份供試品溶液，按上述色譜條件測定，分別吸取10 μL注入液相色譜儀，測得對乙酰氨基酚的平均含量為0.306 8 g/g(n＝5，RSD＝1.50%)。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的仔花感冒膠囊(對乙酰氨基酚含量為0.321 5 g/g)6份，分別準確加入對乙酰氨基酚對照品溶液(98.5 mg/mL)各1 mL，按供試品溶液制備項下操作，制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測定，分別吸取10 μL注入液相色譜儀。結果見表1。表1 加樣回收率試驗結果（略）

2.9 樣品測定

精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，記錄峰面積，根據對照品峰面積，計算出樣品溶液中對乙酰氨基酚的含量(見表2)。表2 樣品測定結果(略)

2.10 專屬性考察

對乙酰氨基酚對照品和仔花感冒膠囊在相同保留時間處有吸收峰，而陰性樣品在此處無吸收峰。色譜圖見圖1。

3 討論

由于仔花感冒膠囊樣品中對乙酰氨基酚含量較大，為了盡量減少誤差，提高方法的準確性，通過紫外掃描，對乙酰氨基酚在249 nm有處最大吸收，故選擇249 nm為檢測波長。

根據文獻報道，曾用過流動相、檢測波長：①甲醇-水(15∶85)，冰醋酸調pH至4.5，波長243 nm[2]；②以甲醇-0.025 mol KH2PO4(15∶85)用磷酸調節至pH 3.0，檢測波長為295 nm[3]，結果以本試驗所用的流動相較佳，對乙酰氨基酚保留時間約為7.6 min，整個分析時間10 min。

在提取條件的選定過程中，我們曾采用過索氏提取法、熱回流法、超聲提取法，結果三者之間提取出的對乙酰氨基酚含量沒有顯著差異，但由于索氏提取法和熱回流法費時間較長，不利于生產過程的控制，超聲20 min提取所測定的對乙酰氨基酚含量最高。因此，選擇了比較簡便、且效率較高的超聲提取法。

參考文獻

[1] 廣西壯族自治區衛生廳.廣西藥品標準[S].1988.217.

高效液相色譜儀范文4

【關鍵詞】 益氣降糖膠囊；葛根素；高效液相色譜法

Abstract:Objective To establish an HPLC method for analyzing the content of puerarin in Yiqijiangtang capsule.Methods Samples were analyzed on an LUNA ODS C18 column（5 m，4.6 mm 200 mm）by using methanol 0.5％HAc（19∶81） as mobile phase. The flow rate was 1.0 ml/min and the detecting wavelength 250 nm.Results The linear range of puerarin was 0.0535-0.535 μg(r＝0.9998). The average recovery was 96.32％（RSD=0.63％）. Conclusion The method is reliable， accurate and specific. It can be used for the quality control of Yiqijiangtang capsule.

Key words:Yiqijiangtang capsule；puerarin；HPLC

益氣降糖膠囊由黃芪、天花粉、葛根、山藥、茯苓、澤瀉、山茱萸等二十幾味中藥組成，具有滋陰清熱、益氣生津、斂氣固精的功效，適用于糖尿病及糖尿病引起的全身綜合征［1］。制劑處方中主藥葛根的有效成分為葛根素、黃豆苷、黃豆苷元等黃酮類成分，其中葛根素的含量最高。為了有效控制該藥品的質量，根據新藥審評有關規定，本文建立了測定益氣降糖膠囊中葛根素含量的高效液相色譜法，結果分離度好、重現性好、靈敏度高，可作為控制益氣降糖膠囊質量的方法。

1 儀器與試藥

儀器：Agilent1100高效液相色譜儀（SPD10AVP紫外檢測器；N2000數據處理系統）；超純水器（Mililpore）；DL360A超聲波清洗器（上海之信儀器有限公司）。

試藥：葛根素對照品（供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110756200305 ）；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純；D101大孔吸附樹脂（安徽蚌阜天星樹脂有限公司）；中性氧化鋁（100～200目，青島海洋化工廠）；益氣降糖膠囊樣品（批號061205，061208，061211）以及陰性樣品（自制）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為DiamonsilTM十八烷基鍵合硅膠柱(200 mm×4.6mm， 5 μm)；柱溫為35 ℃；流動相為甲醇0.5％醋酸（體積比17∶83），流速1.0 mL/min；檢測波長為250 nm；進樣量為10 μL。理論塔板數以葛根素計不得小于5 000， 葛根素與其他峰的分離度應良好。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取葛根素對照品13.37 mg，置10 mL量瓶中，加體積分數為30％的乙醇溶解并定容，即得質量濃度為1.337 mg/mL的對照液，搖勻。精密吸取上述對照液1 mL置10 mL量瓶中，用體積分數為30％的乙醇稀釋至刻度，即得質量濃度為133.7 μg/mL的對照品母液。精密吸取上述對照品母液2 mL置10 mL量瓶中，用體積分數為30％的乙醇稀釋至刻度，即得質量濃度為26.74 μg/mL的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品內容物1 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精確加入體積分數為30％的乙醇20 mL，稱重，超聲提?。üβ?50 W，頻率33 kHz）40 min，放冷，再次稱重（用體積分數為30％的乙醇補足減失的重量），離心，傾出上清液，過濾得濾液。精確吸取該濾液10 mL，水浴蒸干溶劑，殘渣加水15 mL使溶解，通過已處理好的D101大孔吸附樹脂柱（1.5 cm×8 cm，頂端加入5 g中性氧化鋁，樹脂層與氧化鋁層用脫脂棉隔開），先以水150 mL洗脫，再以體積分數為50％的乙醇150 mL洗脫。收集乙醇洗脫液，水浴蒸干溶劑，殘渣加體積分數為30％的乙醇溶解并定容于5 mL量瓶中，搖勻，以微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按處方工藝取各味藥材（缺葛根）制成空白樣品，并按“2.2.2”項下制備陰性樣品溶液。

2.3 測定方法

分別吸取對照品溶液和供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定。實驗結果表明：陰性樣品溶液在與對照品相應的保留時間處，無色譜峰出現，表明方中其余各藥味對葛根素色譜峰測定無干擾。結果見圖1。

2.4 線性關系考察

分別精密吸取質量濃度為0.267 4 mg/mL的對照品溶液0.2、0.4、0.8、1、1.4、1.8、2 mL于10 mL量瓶中，用體積分數為30％的乙醇稀釋至刻度，即得不同質量濃度的對照品溶液，分別精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀中，測定峰面積，以峰面積（A）為縱坐標，相應的進樣質量（m）為橫坐標，繪制標準曲線，葛根素回歸方程為A=4.8×106 m+0.75×103，r＝0.999 8，表明葛根素在0.053 5～0.535 μg質量范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.5 精密度試驗

取質量濃度為26.74 μg/mL的葛根素對照液10 μL，重復進樣6次，測得峰面積RSD為0.26％，表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取同一批供試品（批號：061205）溶液，分別0、2、4、6、8、10、12 h進樣，按上述色譜條件測定，計算葛根素含量，求得RSD為0.68％，表明樣品中的葛根素在12 h內測定結果穩定。

2.7 重復性試驗

取同一批號益氣降糖膠囊樣品（批號061205）6份，按“2.2.2”制備溶液，進行測定，測得葛根素的平均含量為0.0288%，RSD為2.72％（n＝6）。

2．8 回收率試驗

取同一批號（批號061205）已知含量的益氣降糖膠囊樣品6份，每份約0.5 g，精密稱定，置20 mL量瓶中，分別加入質量濃度為133.7 μg/mL的葛根素對照品溶液1 mL及適量體積分數為30％的乙醇，按“2.2.2”項方法操作，測定含量，并計算回收率。結果見表1。

轉貼于 2.9 樣品含量測定

分別取益氣降糖膠囊樣品3批（批號061205，061208，061211），按“2.2.2”制備供試品溶液，進樣測定，結果測得葛根素含量分別為0.285、0.270、0.272 mg/g。 表1 回收率試驗結果

3 討 論

3.1 本制劑藥味較多，制劑成品中葛根素的含量低，且測定干擾大，因此樣品的前處理尤為關鍵。在樣品溶液制備過程中，參考文獻［2-5］，考慮采用體積分數為30％的乙醇或甲醇超聲提取的方法，由于甲醇提取液HPLC圖中的干擾組分多，葛根素無法達到基線分離，故采用體積分數為30％的乙醇提取并進一步精制濃縮。參考文獻［6］，將體積分數為30％的乙醇提取液采用大孔吸附樹脂純化，對樹脂種類、洗脫劑等進行了研究，最終確定采用D101大孔樹脂作為吸附劑，依次用水及體積分數為50％的乙醇洗脫，達到了濃縮精制的目的。

3.2 試驗過程中發現，單獨使用大孔吸附樹脂純化所得的洗脫液中固體物較多，難以用少量的溶劑溶解定容。在大孔樹脂柱上加適量中性氧化鋁預先吸附上樣液后，效果較為理想。氧化鋁可以吸收大量雜質，但不影響葛根素的回收率，說明葛根素沒有被中性氧化鋁吸附。

3.3 考察了甲醇0.1％磷酸（體積比26∶74）、乙腈水（體積比15∶85）、甲醇水（體積比20∶80）、甲醇0.5％醋酸（體積比19∶81）等流動相，以甲醇0.5％醋酸（體積比19∶81）的保留時間較為適宜，且分離度良好，其余幾種條件葛根素保留時間短，分離度差。另外，對樣品超聲處理時間進行了考察，結果表明樣品超聲時間30　min以上，被測組分含量不再增加，說明超聲時間30　min以上即可，故將樣品處理的超聲時間定為40　min。

參考文獻

［1］ 李茜.李書義治療糖尿病的經驗［J］.中國中醫藥雜志，2004，2（5）：283-284. ［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部［S］.北京：化學工業出版社，2005.

［3］ 曹雪慧，劉晶晶.反相高效液相色譜法測定頸通顆粒中葛根素的含量［J］.時珍國醫國藥，2007，18（4）：881-882.

［4］ 梁軍，郭衛東，高睿.冠脈寧軟膠囊中葛根素含量測定［J］.遼寧中醫雜志，2006，33（12）：1619-1620.

高效液相色譜儀范文5

關鍵詞：高效液相色譜法 脫氫乙酸 食品檢測

脫氫乙酸具有較強抑制細菌、霉菌及酵母菌發酵的作用，尤其對霉菌的抑制作用最強，是一種高效的防霉、防腐劑。其還具有脂溶性強、熱穩定性高的特點，在攝氏120℃的殺菌溫度下仍保持殺菌能力不變。國外曾廣泛使用于食品、藥品中，我國自上世紀70年代中其開始用于食品防腐，曾用于果汁、醬菜、腐乳、干酪、人造奶油、乳酸菌飲料、月餅、果醬等食品。脫氫乙酸的缺點是毒性較強，目前我國允許在腐乳、醬菜、果蔬汁、肉類制品、糕點、月餅、焙烤餡料中作為防腐劑使用，最大使用量0.5克/公斤。脫氫乙酸的國標檢測方法為氣相色譜法，樣品經過有機溶劑的萃取、凈化、濃縮等步驟的復雜處理，并且脫氫乙酸在氣相色譜條件下色譜峰出現拖尾現象，使定性、定量影響較大。據報道利用高效液相色譜法食品中脫氫乙酸，采用純水、乙醇-水、堿性水對樣品進行超聲萃取處理，萃取液經過濾后上機檢測。作者在試驗中發現，利用脫氫乙酸難溶于水而易溶于甲醇、乙醇、乙腈等有機溶劑的特性，樣品均漿后酸化處理，用乙腈提取，經微孔過濾后用高效液相色譜進行定性、定量測定，方法的靈敏度、準確度和回收率高，精密度良好，重現性好，前處理簡便快捷，更能滿足樣品分析要求。

一、材料與方法

（一）儀器

Waters公司的高效液相色譜儀，1525泵，2486檢測器，717自動進樣器，BREEZ色譜管理軟件；Waters C18 5um，4.6 mm X 250 mm色譜柱。旋渦混合器，離心機TGL-10B，MILLI-Q，超純水機。

（二）試劑

乙腈 色譜純

乙酸銨 分析純

氯化鈉 分析純

脫氫乙酸，純度99.9%（日本生產）

（三）測定方法

1、色譜條件

流動相 乙腈―0.02mol / ml乙酸銨溶液（15+85）

流速 1.0 ml / min

溫度 35℃

進樣量 10 μl

2、實驗方法

實驗樣品材料用一般市售的果汁、醬菜、腐乳、糕點等食品。果汁樣品精確稱取5.00 g于50 ml的離心管中；醬菜、腐乳、糕點等食品樣品事先均勻，準確稱取2.0～3.0 g于50ml的離心管中，加入5mL飽和氯化鈉溶液和1ml鹽酸溶液（1 ：1），用旋渦混合器混合1分鐘，準確加入10mL乙腈，用旋渦混合器混合3分鐘，3000轉離心15分鐘，取上清液經0.45μm過濾器過濾后供液相色譜測定。

3、色譜分析

按1.3.1色譜條件對樣液進行分析，采用外標法，以保留時間定性，以峰面積定量，測定樣液中脫氫乙酸的濃度（mg/ml）。

二、結果與討論

（一）檢測波長的確定

根據掃描的結果，脫氫乙酸的最大吸收波長在230 nm和297 nm處，230 nm處吸收較強，但基體于擾較多，在波長297NM處基體干擾較少，故選取檢測波長297NM。

（二）流動相的選擇

流動相為乙腈+水時，脫氫乙酸峰形拖尾，使用0.02 mol / L的乙酸銨代替水作流動相，峰形得到較大的改善。乙腈的比例影響出峰的時間和響應，乙腈的比例低，保留時間長，響應也會低，乙腈比例高時，出峰時間短，響應也較高。試驗表明，當0.02 mol / L的乙酸銨―乙腈比例為85：15時效果較好。

（三）提取液的選擇

脫氫乙酸難溶于水，易溶于苯、氯仿、乙醚。脫氫乙酸鈉則易溶于水，選用水或氫氧化鈉溶液、碳酸鈉溶液提取，提取液須凈化后方可使用。本方法選用乙腈作提取液，主要考慮到脫氫乙酸能溶液于乙腈，乙腈的水溶性有利于乙腈從酸性的樣液中把脫氫乙酸完全溶解，同時乙腈可沉淀蛋白質，與脂肪不溶，離心分離得到干凈的提取液。

（四）色譜分離

在1.3.1色譜條件下測定，脫氫乙酸的保留時間為5.775min，峰形及組分分離效果好，色譜圖見圖1。

圖1脫氫乙酸色譜圖

（五）標準曲線

以70%乙腈水溶液為溶劑配制濃度0.01～0.1范圍內的脫氫乙酸標準使用液，測定結果見表1。以峰面積對脫氫乙酸濃度進行回歸分析得回歸方程式Y=2.39X×1081.33×105，R= 0.9997，線性良好。在對同一濃度標樣連續進樣5次，得到脫氫乙酸的峰面積和保留時間的RSD值分別為0.35%和0.24，方法的定性和定量準確度較高。

表1 脫氫乙酸標準系列測定結果

（六）方法的回收率和精密度試驗

稱取不含脫氫乙酸的腐乳3g樣品3份，分別加入0.1mg、0.2mg、0.4mg、0.6mg、1.0mg脫氫乙酸標樣，按1.3.2、1.3.3和1.3.4步驟處理測定，經計算，加標回收率為96.2%～99.6%，平均回收率為98.6%。

選擇添加有脫氫乙酸的腐乳樣品，按按1.3.2、1.3.3和1.3.4步驟對同一樣品分別做6次平衡測定，測定結果值分別為0.193、0.196、0.195、0.199、0.196和0.194g/kg，測得標準偏差2.14×103，變異系數RSD值為1.09%。

（七）樣品測定

應用本方法對市售產品果汁、醬菜、腐乳、月餅中脫氫乙酸含量量的測定，結果詳見表2。

表2 市售樣品中脫氫乙酸測定結果

參考文獻：

高效液相色譜儀范文6

【摘要】 目的: 采用反相高效液相色譜法測定吸入用異丙托溴銨溶液的含量。方法: 色譜柱為 phenomenexC8 （4.6 mm×250 mm，

5 μm），流動相為乙腈0.25%庚烷磺酸鈉溶液（29∶71）用磷酸調pH值至3.2；檢測波長為210 nm；流速為1.0 mL/min；進樣量20 μL。結果:異丙托溴銨在12.8～256 μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系，r=0.9995，日間、日內RSD均小于1.5%。結論：本方法準確可靠，可用于吸入用異丙托溴銨溶液的質量控制

【關鍵詞】 異丙托溴銨；含量測定；高效液相色譜法

異丙托溴銨是一種具有抗膽堿能特性的四價銨化合物，可競爭性抑制乙酰膽堿對氣道平滑肌的收縮作用。通過抑制細胞內cGMP生成，減少cAMP降解，降低細胞內鈣離子濃度，使氣道平滑肌松弛，肥大細胞釋放炎性介質下降，終止氣道擴張，呼吸阻力減小。吸入異丙托溴銨后，作用只限于肺部擴張支氣管，而不作用于全身，主要采用氣霧吸入給藥［1］。吸入用異丙托溴銨溶液在臨床上應用較廣泛，主要采用壓縮霧化吸入或超聲霧化吸入給藥，常用于預防和治療兒童支氣管哮喘。本文考察了異丙托溴銨含量的HPLC測定方法，為制劑的質量控制提供了方法學依據。

1 儀器與材料

LC10ATvp高效液相色譜儀（日本島津公司）；異丙托溴銨對照品（購自浙江優聯醫藥化工有限公司，經精制后色譜峰為單峰）；吸入用異丙托溴銨溶液（愛全樂）購自德國勃林格殷格翰國際公司（批號638066，規格為含異丙托溴銨2 mL∶500 μg）；庚烷磺酸鈉為離子對色譜試劑，純度≥99％，購自上海億日化工科技有限公司；乙腈為色譜純；其它試劑為分析純。

2 含量測定

2.1 色譜條件

參照文獻［24］，選定試驗條件為：C8色譜柱（phenomenexC8 5 μm，4.6 mm×250 mm）；流動相為乙腈0.25%庚烷磺酸鈉溶液（29∶71）用磷酸調pH至3.2；檢測波長為210 nm；流速為1.0 mL/min；進樣量20 μL。

2.2 對照品貯備液的制備

精密稱取在五氧化二磷干燥器中減壓干燥24 h的異丙托溴銨對照品12.80 mg，精密稱定，置10.0 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1.28 mg/mL的異丙托溴銨對照品液，備用。

2.3 供試品溶液的制備

取本品15瓶，合并內容物，混勻，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加0.001 mol/L鹽酸溶液甲醇（1∶1）稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4 系統適應性試驗

取溴化鉀適量，用流動相溶液溶解制成溴化鉀溶液。精密吸取溴化鉀溶液、“2.2”、“2.3”項下溶液適量，分別按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖1。由圖1可知，與異丙托溴銨對照品比較，供試品異丙托溴銨色譜峰分離良好，符合高效液相色譜法的要求，且溴離子不影響本品含量測定。異丙托溴銨的出峰時間約在22 min。

2.5 最低檢測限和最低定量限

取異丙托溴銨對照品適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成供試液，按上述色譜條件取10 μL進樣。經試驗，當進樣濃度為0.3 μg/mL時，信噪比為3∶1，即最低檢測限為0.3 μg/mL×10 μL=3 ng；當進樣濃度為1.1 μg/mL時，信噪比為10∶1，即最低檢測限為1.1 μg/mL×10 μL=11 ng。

2.6 線性范圍考察

取對照品儲備液，分別精密吸取0.1、0.2、0.4、0.8、2.0 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得濃度依次為12.8、25.6、51.2、102.4、256 μg/mL的系列標準溶液。照上述色譜條件，進樣20 μL，以樣品濃度C為橫坐標，峰面積A為縱坐標，繪制標準曲線，計算得回歸方程為：A=5900.864C+16415，r=0.9995，線性范圍為12.8～

256 μg/mL。

2.7 精密度試驗

分別取12.8、51.2、2560 μg/mL三種濃度的對照品溶液，于1 d內分別進樣5次及5 d內分別進樣5次，分別計算日內、日間RSD。結果見表1。表1 精密度試驗結果（略）

2.8 樣品溶液穩定性試驗

取批號為638066的樣品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，在12 h內每隔3 h進樣測定1次，測得RSD為1.30%，表明在12 h內樣品溶液穩定性較好。

2.9 重復性試驗

取批號為638066的樣品，按“2.3”項下方法平行制備5份供試品溶液，分別進樣，測得RSD為1.03%，表明該法重復性較好。

2.10 回收率試驗

取異丙托溴銨對照品約16 mg、20 mg和24 mg各三份，精密稱定，按處方比例加入空白輔料適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定含量，計算回收率，結果見表2。表2 回收率試驗結果（略）

2.11 樣品含量測定

取批號為638066樣品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，依法測定，樣品含量測定結果為98.8%。

3 討論

異丙托溴銨為溴化季銨鹽，在溶液狀態下，其溴以離子形式存在［3］，在210 nm處有一定紫外吸收。為驗證該測定方法溴離子的存在不影響異丙托溴銨的含量測定，故選定溴化鉀進行了試驗。試驗表明，采用該測定方法，溴離子不干擾異丙托溴銨的含量測定。流動相采用等度洗脫系統，用二極管陣列檢測器測定異丙托溴銨對照品的峰純度大于99.8%，表明主峰為單一峰，在210～400 nm波長掃描，未漏檢雜質峰。異丙托溴銨濃度在12.8～256.0 μg/mL范圍內與峰面積呈良好線性關系。

本方法靈敏度高，方法準確，重復性好，且操作簡單，可用于吸入用異丙托溴銨溶液的質量控制。

參考文獻

［1］付笑飛. 異丙托溴銨的藥理基礎及臨床應用現狀［J］.中華醫學雜志， 2005， 29(02): 139140.

［2］Peter JS， Robert WT， Cynthia SG， et al. The separation of ipratropium bromide and its related compounds ［J］. J of Pharmaceutical and Biomedical Analysis， 1998，17: 841849.