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高效液相色譜范文1

關鍵詞：葛粉;葛根素;HPLC

Abstract:Object:DeterminationofPuerariainPuerariaPowderMethods:PuerariaweredeterminedbyHPLC.ThemobilephasewasMeOH－H2O－HAc（30：70：0.5）.Detectionwavelengthwasat250nm.Results:Puerariashowedagoodlinearrelationship.Theaveragerecoverywas98.6%andRSDwas1.76%.Conclusion:Thismethodwassimple,quickandaccurate.

Keywords:PuerariaPowder;Pueraria;HPLC

葛根為豆科植物野葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi的干燥根,是常用中藥材,具有解肌退熱，生津，透疹，升陽止瀉功效，用于外感發熱頭痛、項背強痛，口渴，消渴，麻疹不透，熱痢，泄瀉，高血壓頸項強痛等[1]?，F代研究證實，葛根中的主要有效成分為葛根素等異黃酮類化合物，具有抗炎解熱、擴張冠狀動脈血管、增加冠狀動脈血流量的作用，同時也有降低血壓的作用。有關葛根中葛根素等異黃酮的含量測定研究已有不少報道[2-5]，但對葛粉中葛根素含量測定報道不多。本文對葛粉中葛根素的提取條件和測試條件等進行比較研究,并采用高效液相色譜法對葛粉樣品進行了定量分析,結果令人滿意。

1實驗部分

1.1儀器與試劑

島津LC－10Atvp高效液相色譜儀；SPD－10Avp紫外檢測器；島津UV－265紫外分光光度儀，多功能榨汁機/攪拌機SG300－I（上海科駿電器有限公司）。甲醇（色譜純），水（二次蒸餾），其余均為分析純。葛根素對照品（中國藥品生物制品檢定所）；鮮葛（浙江省永嘉縣潘坑鄉）。

1.2色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；色譜柱C18diamonsil5ul(150×4.6mmI.D)，MeOH－H2O－HAc（30：70：0.5）為流動相，紫外檢測波長250nm。

2結果與討論

2.1提取溶劑濃度的選擇

精密稱取同一樣品約0.1g,分別加30%乙醇、50%乙醇和80%乙醇10ml，超聲提取60分鐘，進樣5ul,比較峰面積，實驗結果表明30%乙醇提取最好。

2.2超聲提取時間的選擇

精密稱取同一樣品約0.1g,分別加30%乙醇10ml，超聲提取30分鐘、45分鐘、60分鐘，進樣5ul,比較峰面積，實驗結果表明超聲60分鐘為最佳提取條件。

2.3流動相及流速的選擇

試驗時曾采用下述流動相進行測定：甲醇－水（25：75）、甲醇－水－醋酸（30：70：0.5）、甲醇－水（30：70）為流動相，結果采用甲醇－水－冰醋酸（30：70：0.5）為流動相，樣品分離好。而流速也以1.0ml/min為合適。

2.4標樣溶液的制備

稱取一定量葛根素對照品,用30%乙醇溶解配制成濃度為13ug/ml的葛根素標準液。

2.5葛粉制備

取鮮葛用水洗凈切片,稱取20g放入攪拌機內，攪拌三次，每次1分鐘，每次加水200ml，150ml，100ml，合并漿汁放置二天，去掉上面的水，下面的粉漿用定量濾紙過濾，低溫干燥，放入干燥器中備用。

2.6供試品溶液制備

精確稱取一定量葛粉于10mL容量瓶中,加30%乙醇10ml,超聲提取1h,濾紙過濾,濾液過0.45um濾膜作為供試品溶液。

2.7線性關系考察

在上述色譜條件下，分別進標樣溶液0.5、3、5、7、10μl，測得各峰面積。以葛根素為橫座標（A），以峰面積（Y）為縱座標，計算得回歸方程：Y=3.90×106x+728.14,相關系數r＝0.9999；結果紫外檢測葛根素在0.0065-0.13μg范圍內呈良好線性關系。

2.8精密度試驗

取上述標樣溶液，連續進樣5次，測定，RSD為1.11%。

2.9重復性試驗

取同一樣品重復測定5次，RSD為1.61%。

2.10穩定性試驗

取上述供試品溶液，0、2、5、7、10h進樣，RSD為2.1%，10小時內進樣穩定。

2.11回收率試驗

取已知含量的樣品，分別加入葛根素標樣，按上述方法測定5次，平均回收率為98.6%,RSD為1.76%。見表1。

2.12樣品分析

精密吸取標樣溶液5μl與供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定，結果:葛粉中葛根素的含量為0.06%（n=3），見下圖。

3討論

本文采用高效液相色譜法測定葛粉中葛根素的含量,方法簡單、快速、準確，結果滿意，可用于葛粉中葛根素的含量測定。

[參考文獻]

[1]中國藥典2005版一部.2005:233-234.

[2]章育中，楊凡。高效液相色譜法測定葛根及其片劑中異黃酮的含量.藥物分析雜志，1984,4(2):67.

[3]張蕾,潘揚，朱蓉貞，等。不同品種及產地的葛根中葛根素含量的比較。中國中藥雜志，1995,20(7):399.

高效液相色譜范文2

【摘要】

目的： 建立夏枯草的指紋圖譜分析方法，并對不同產地的夏枯草進行指紋圖譜的比較研究。方法：以齊墩果酸為參照，采用高效液相色譜法，色譜柱為Hypersil C18，流動相為甲醇：水：醋酸（86：14：0.1），檢測波長為208nm，流速為1ml/min。結果： 標出10個主要共有峰，方法學考察表明，本研究建立的分析方法有較好的重現性，比較了不同產地夏枯草藥材與標準藥材指紋圖譜的相似性。結論： 方法穩定、可靠、簡便，為提高夏枯草藥材質量控制提供依據。

【關鍵詞】 夏枯草； 高效液相色譜； 指紋圖譜

夏枯草為唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗，我國各地均產，主產于江蘇、浙江、安徽、河南等地［1］。夏枯草臨床應用廣泛，藥典中載有“清火、明目、散結、消腫”［2］之功效，現代研究表明夏枯草還具有降血脂，降血糖，免疫抑制以及抗腫瘤等作用［3］。目前，市場上夏枯草產地多，質量不一，缺乏統一質量檢測標準，通常采用測定其中一、兩種化合物含量的方法來進行質量評價，不足以全面反映藥材的整體質量。本研究利用高效液相色譜法對夏枯草進行了指紋圖譜的研究，結果表明，本方法穩定、可靠、重現性好，可為夏枯草藥材質量控制提供有效的參考依據。

1 儀器與試藥

日立高效液相色譜儀，DAD檢測器，EZChrom Elite色譜工作站；KQ100A型超聲波清洗器；電子天平。

夏枯草對照藥材及齊墩果酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。夏枯草藥材分別購自各地藥材市場和藥店，經鑒定為夏枯草藥材的干燥果穗。

甲醇為色譜純，其它試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil C18，4.6*250mm，10μm；流動相：甲醇：水：醋酸（86：14：0.1）；檢測波長為208nm；流速為1ml/min。

2.2 供試品溶液的制備

將夏枯草藥材擇去雜質，60℃恒溫干燥，粉碎機粉碎，粉末過40目篩，反復進行，直至藥材粉碎全部過篩為止。精密稱定夏枯草藥材粉末約1g，加入90%甲醇20ml，超聲30min，過濾，洗滌，合并濾液和洗液，揮干溶劑，殘渣加流動相溶解定容至10.00ml，溶液用微孔濾膜過濾，得夏枯草液，10μl進樣。

2.3 流動相的選擇

試驗過程中，系統比較了不同配比的甲醇水（80：20；84：16；86：14；88：12）和乙腈水（80：20；85：15；90：10）及添加劑的用量。結果表明，以甲醇：水：醋酸（86：14：0.1）為流動相系統效果較佳。

2.4 檢測波長的選擇

試驗采用DAD檢測器，在波長190～400nm范圍內進行夏枯草樣品的吸收情況考察。通過比較各不同保留時間的峰的紫外吸收光譜，得知多數峰的最大吸收在203～210nm范圍，少數在230nm附近，綜合比較各波長處的色譜圖，最終確定208nm作為檢測波長。

2.5 參比峰的選擇

為消除測定結果的系統誤差，選取與其它組份分離較好、峰形對稱、保留時間24.617min的色譜峰作為參比峰（經與標準品色譜圖譜及紫外吸收圖譜對照，得知此組份為齊墩果酸），以便計算夏枯草藥材共同特征組份的相對保留時間和相對含量［4］。

夏枯草標準藥材的色譜圖及齊墩果酸標準品色譜圖見圖1和圖2。

2.6 方法學驗證

2.6.1 精密度試驗 同一夏枯草樣品液，在相同條件下，重復進樣5次，得到色譜圖，計算保留時間和峰面積的RSD%。結果見表1。

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2.6.2 重現性試驗 同一夏枯草樣品在相同條件下平行提取5份，分別進樣，得到色譜圖，計算保留時間和峰面積的RSD%。結果見表2。

2.6.3 穩定性試驗 同一夏枯草樣品液分別于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h進樣，計算所得色譜圖中各相對應的保留時間和峰面積的RSD%。結果見表3。

圖1 夏枯草標準藥材色譜圖（略）

圖2 齊墩果酸標準品色譜圖（略）

表1 精密度試驗（略）

表2 重現性試驗（略）

表3 穩定性試驗（略）

2.7 夏枯草HPLC指紋圖譜的建立

按供試品的制備和檢測方法，對31份夏枯草藥材分別測定色譜圖。比較各夏枯草藥材的色譜圖，結合各組份峰的紫外吸收特征，確定相同組份峰，計算各組份相對保留時間及相對峰面積。

αi=ti / ts ，α為相對保留時間，ts為內參峰保留時間，ti為其它組分保留時間。

Ar=Ai×100/∑A ，Ar為相對面積值，Ai為各組分面積值，ΣA為總峰面積。

選取10個主要共有峰為特征峰，其面積和占到總面積的99%以上，建立夏枯草樣品藥材的HPLC相對保留值指紋圖譜。結果見表4，其中αi為31種樣品譜圖中相同組份的相對保留時間值的平均值。

2.8 夏枯草HPLC指紋圖譜相似度的計算

以10批夏枯草對照藥材的HPLC圖譜為標準，用計算機輔助中藥指紋圖譜相似度計算軟件計算31個夏枯草樣品藥材的HPLC圖譜與對照藥材的相似度。結果見表5。

表4 夏枯草樣品藥材的HPLC相對保留值指紋圖譜（略）

表5 樣品相似度計算結果（略）

3 討論

對夏枯草的高效液相色譜條件進行了考察，包括流動相的組成、配比等，并依據不同保留時間峰的紫外吸收特征確定檢測波長。確定色譜條件為：流動相為甲醇水醋酸（86：14：0.1）；流速為1ml/min；進樣量為10μl；檢測波長為208nm。在此色譜條件下，基線穩定，各峰得到了較好的分離，峰形、保留時間等也較好。

對中藥夏枯草的HPLC指紋圖譜進行了系統的研究，建立了31種夏枯草樣品藥材的HPLC相對保留值指紋圖譜，并進行了夏枯草樣品藥材與標準藥材相似度的研究。為夏枯草藥材的質量控制提供了依據，為建立規范化的夏枯草種植基地提供了有效的質量控制手段。

【參考文獻】

1 鄭漢臣，蔡少青．藥用植物學與生藥學.北京：人民衛生出版社，2004，389．

2 國家藥典委員會，中華人民共和國藥典（一部）.北京：化學工業出版社，2005，197～198．

高效液相色譜范文3

關鍵詞：咽炎方含片；指紋圖譜；高效液相色譜法

咽炎方含片由廣東土牛膝、崗梅根和甘草組成，用于治療急慢性咽炎、咽喉腫痛、扁桃體炎，是中山大學附屬第一醫院臨床應用多年的經驗方。方中廣東土牛膝、崗梅根均為廣東地產藥材，其化學成分、尤其是有效成分或標志性化合物尚未明確，給有效控制及評價該制劑的質量帶來了一定的困難。鑒于指紋圖譜技術是一種多組分復雜樣品質量評價的有效方法，本試驗擬建立該制劑的中藥高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜，以便更全面地控制該制劑的質量。

1 儀器與試藥

Waters 515液相色譜儀，AL204型電子天平（瑞士METTLER- TOLEDO公司）。

甘草苷對照品（批號111610-200604）購自中國藥品生物制品檢定所，乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為重蒸餾水。咽炎方含片樣品為中山大學附屬第一醫院藥學部自制。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

采用Phenomenex C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為0.2%磷酸溶液（A）-乙腈（B）。梯度洗脫程序為：0～30 min， 85%～75%A；30～40 min，75%～65%A；40～50 min，65%～85%A；50～60 min，85%A。檢測波長為203 nm，柱溫為室溫，流速為1.0 mL/min。

基金項目：廣東省重大科技專項（2011A080300004）

通訊作者：任斌，E-mail：

2.2 供試品溶液的制備

取20 片咽炎方含片，研細，取約6.0 g 片粉，精密稱定，置100 mL量瓶中，加50%甲醇至90 mL，超聲（1 200 W，20 kHz）處理15 min，放冷，加50%甲醇至刻度，搖勻，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得[1]。

2.3 方法學驗證

2.3.1 精密度試驗 取同一批號（20100201）樣品，按“2.2”項下方法操作，在上述色譜條件下，重復進樣5次，記錄指紋圖譜。結果各色譜峰對參照峰（7號峰，甘草苷）相對保留時間和相對峰面積的RSD值均小于4.0%，符合指紋圖譜要求。

2.3.2 重復性試驗 取同一批號（20100201）樣品5份，按“2.2”項下方法操作，在上述色譜條件下進樣分析，計算各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積，其RSD值均小于3.6%，符合指紋圖譜要求。

2.3.3 穩定性試驗 取同一批號（20100201）樣品，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，于室溫下放置，分別在0、2、4、8、12、24 h進樣分析，計算各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積，其RSD值均小于2.7%。結果表明，咽炎方含片樣品溶液在24 h內穩定。

2.4 指紋圖譜的建立

2.4.1 特征峰的確定 在上述色譜條件下，測定10批咽炎方含片，記錄圖譜。對10批供試品結果進行分析比較，標定了9個共有指紋峰，典型色譜圖見圖1。2、4、6號峰來源于廣東土牛膝，1、5、9號峰來源于崗梅根，3、7、8號峰來源于甘草。

2.4.2 參照峰的選擇 保留時間為25.1 min的7號色譜峰峰面積較大，出峰時間適中且穩定，經標準品對照認定為甘草苷的吸收峰，因此選擇甘草苷作為HPLC指紋圖譜的參照峰，以其保留時間和峰面積為1.0，計算各批指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，結果見表1、表2。

2.4.3 相似度分析 采用國家藥典委員會的中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件（版本2004 A），對10批咽炎方含片的指紋圖譜進行分析，以色譜峰的平均值建立對照指紋圖譜，利用相關系數法計算指紋圖譜的相似度，結果見表3。

3 討論

本研究考察了3種不同型號色譜柱：Hypersil BDS C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Diamond C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Phenomenex Luna C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。結果表明， Phenomenex Luna C18柱分離出的色譜峰分離度好、峰數多、穩定性好。故選擇 Phenomenex Luna C18柱為分析色譜柱。

試驗發現，采用常規的水浴（50 ℃）攪拌法，咽炎方含片完全溶解需40 min，而采用50%甲醇超聲處理，只需15 min即可完全溶解。超聲處理法不但能加快含片的溶解速度，省時、節能，最主要的是能避免加熱導致的熱敏成分的破壞。因此采用50%甲醇超聲處理15 min來溶解咽炎方含片。

咽炎方含片中崗梅根主要含有皂苷類成分，紫外吸收波長短。為使各被測組分均有較大吸收，選用203 nm為指紋圖譜檢測波長[2]。比較乙腈-磷酸水溶液和甲醇-磷酸水溶液系統下的色譜圖，結果乙腈-磷酸水溶液系統梯度洗脫的柱壓較低，流動相的改變對其基線影響較小。

各批次藥材的來源、質量對指紋圖譜有明顯影響。根據相似度分析結果，結合色譜峰面積相對于稱樣量與平均片重量化，相似度在0.90以上的樣品質量較好，0.90以下的為質量較差[3]。批次2、3、4、6、7、8、9、10樣品指紋圖譜相似度為0.949 0～0.990 2，說明各批次咽炎方含片之間具有較好的相似性，樣品質量較好，而批次1、5樣品指紋圖譜相似度小于0.90，說明質量較差。

本試驗建立了咽炎方含片的HPLC指紋圖譜，確定了9個共有峰，計算了10 批咽炎方含片的指紋圖譜的相似度。同時，本試驗明確了9個共有峰的原藥材歸屬，為咽炎方含片的定量指標的選擇和確定提供了參考。本試驗建立的咽炎方含片指紋圖譜具有重復性好、特征性強、方法簡便等特點，為咽炎方含片的質量控制奠定了基礎。

參考文獻：

[1] 韋炳華，李瑞明，盧進，等.咽炎方含片的制備工藝研究[J].今日藥學， 2012，22（5）：272-273.

[2] 盧進，任斌，陳孝.廣東崗梅藥材的HPLC指紋圖譜研究[J].熱帶醫學雜志，2011，11（5）：550-552.

高效液相色譜范文4

關鍵詞：綠谷隆；反相高效液相色譜；外標法

1 概述

綠谷隆純品為白色結晶固體，是一種用于防除禾谷類及玉米田中雜草的除草劑，目前國內尚無綠谷隆的國家標準和行業標準，根據綠谷隆的物化性質和實際生產的需要，我們選擇高效液相色譜法進行定量分析，該方法具有較高的精密度和準確度，且快速、準確，可作為綠谷隆的產品檢驗分析方法。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

島津LC-20AT具紫外可變波長檢測器，色譜工作站，綠谷隆標準品≥98%，甲醇HPLC，新蒸二次蒸餾水，色譜柱：150mm×4.6mm×5μm，C18不銹鋼柱，進樣針：100μL。

2.2 液相色譜操作條件

流動相：甲醇+水=70+30（V/V），柱溫：（25±5）℃，檢測波長：254nm。流速： 1.0ml/min。保留時間：綠谷隆約：7.1min，綠谷隆標準品分離見圖1，樣品分離見圖2。

2.3 測定步驟與計算

2.3.1 測定步驟

（1）標準溶液的的配制。準確稱取約0.1g（精確到±0.0001g）綠谷隆標準品于50ml容量瓶中，用甲醇在超聲波中溶解，取出冷卻至室溫，用甲醇稀釋到刻度并搖勻。用移液管準確移取2.00ml該溶液于50ml容量瓶中，用流動相稀釋定容至刻度，搖勻備用。

（2）樣品溶液的配制。準確稱取約0.1g（精確到±0.0001g）綠谷隆樣品于50ml容量瓶中，用甲醇在超聲波中溶解，取出冷卻至室溫，用甲醇稀釋到刻度并搖勻。用移液管準確移取2.00ml該溶液于50ml容量瓶中，用流動相稀釋定容至刻度，搖勻備用。

（3）測定。在上述色譜條件下，待儀器穩定后，連續注入綠谷隆標準溶液于色譜柱內，待相鄰兩針的綠谷隆標樣峰面積變化小于1.0%時，按下列順序進行色譜分析：標樣溶液、樣品溶液、樣品溶液、標樣溶液。

2.3.2 計算

將測得兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標樣溶液中綠谷隆的峰面積分別進行平均，試樣中綠谷隆質量百分含量X按下式計算：

式中：r1-標樣中綠谷隆的峰面積；r2-試樣中綠谷隆的峰面積；m1-標樣的質量，g；m2-樣品的質量，g；P-標樣中綠谷隆的質量百分含量%；

允許誤差：兩次平行測定結果之差小于0.5%，取其平均值作為樣品中綠谷隆的百分含量。

2.4 結果與討論

2.4.1 色譜條件的確定

（1）分離方法及檢測器的選擇。經過反復實驗證明，綠谷隆在HPLC反相C18柱上分離效果和峰形良好，保留時間短，因此選用反相HPLC法分析。紫外檢測器是高效液相色譜儀中應用最廣泛的檢測器，它靈敏度高，噪音低，線性范圍寬，對流速和溫度均不敏感，根據綠谷隆的結構特點，通過實驗證明，綠谷隆在紫外區內有很大吸收，因此紫外檢測器可以作為分析綠谷隆的首選檢測器。

（2）溶劑的選擇。反相色譜法：固定相（填料）為非極性，流動相為極性。對應的色譜柱：烷基硅烷化鍵合硅膠填料，如C18（ODS）C8，C4，C3，苯基等。反相色譜中最常用的流動相及其洗脫強度：水

（3）流動相配比的選擇。綠谷隆在流動相甲醇+水=80+20（V/V）時，保留時間過短，分離效果較差，在流動相甲醇+水=70+30時，峰形對稱，分離效果良好，保留時間適中，且綠谷隆在甲醇中都有很好的溶解度，因此確定流動相甲醇+水=70+30為流動相操作條件。

（4）波長的選擇。通過對綠谷隆吸收曲線的測定，綠谷隆在波長254nm和220nm處，都有很強的響應；在波長220nm處，吸收太強，峰高太高，超出檢測器線性范圍，若減少稱樣量或進樣量，會影響結果的精密度和準確度；在254nm處，樣品的稱樣量和峰高的比例適中，所以最后選擇254nm作為綠谷隆的測定最佳波長。

2.4.2 方法的線性范圍

準確稱取不同質量的綠谷隆標準品配成不同濃度的溶液，在2.2色譜操作條件下測定，線性回歸方程為：Y=06X+7E+58477，相關系數R2=0.9994。

2.4.3 精密度的測定

用同一樣品在規定色譜條件下進行多次測定，其結果如表1所示：

表1 精密度測定結果數據表

2.4.4 回收率的實驗

用綠谷隆標樣加入到已知含量的綠谷隆的樣品中，在規定的色譜條件下測定其回收加入率。結果如表2所示：

由23可知綠谷隆的回收率在98.8-100.4之間，說明方法的準確度較好。

3 結束語

利用反相高效液相色譜的外標法測定了綠谷隆的含量。該方法簡便、快速，具有較高的精密度和準確度，是一種較好的優化方案，可以作為綠谷隆產品的質量分析。

參考文獻

[1]杭州大學.分析化學手冊（第二分冊）化學分析[M].北京：化學工業出版社，2001.

高效液相色譜范文5

關鍵詞：谷氨酰胺 高效液相色譜法 測定

中圖分類號：R927 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2014）05（b）-0240-02

谷氨酰胺（Glutamin）亦被稱作麩酰胺酸，為人體中含量最豐富的非必需氨基酸。臨床上主要用于改善胃潰瘍和十二指腸潰瘍的癥狀。常見的分析方法有毛細管電泳法[1]。本文建立了通過高效液相色譜法測定谷氨酰胺的方法，實驗證明該方法操作簡便、專一性及靈敏度高，結果準確可靠。

1 材料與方法

1.1 儀器

HLPC色譜儀型號：LC-20A，色譜儀編號：L20134506488AE，分析天平型號：AE100 分析天平編號：LS012，超聲波型號：AS3120A，檢測波長：λ=215 nm。

1.2 色譜條件

檢測器型號：SPD-20A，檢測器靈敏度：2.0AUFS柱溫：35 ℃，進樣體積：20 ul流速：1.0 ml/min，流動相：0.05 moL/L的磷酸二氫鉀（取磷酸二氫鉀6.8 g，加水至1000 ml，用磷酸調節PH值為4.0）∶乙腈=70∶30，色譜柱：NH￠4.6×250 mm，色譜柱號：312316。

1.3 材料與試劑

乙腈（色譜純，康科德公司），磷酸二氫鉀（AR級），磷酸（AR級），谷氨酰胺對照品（山東寶生物技術有限公司），高純水。

1.4 樣品制備

標準溶液的制備：精密稱取谷氨酰胺標準品250 mg于50 ml容量瓶中，用純化水稀釋并定容至刻度，搖勻，再精密吸取2 ml于10 ml容量瓶中，用流動相稀釋定容至刻度，搖勻，備用。其濃度為1 mg/ml。

樣品溶液的制備：稱取本品約250 mg，精密稱定于50 ml容量瓶中，用純化水稀釋并定容至刻度，搖勻，再精密吸取2 ml于10 ml容量瓶中，用流動相稀釋定容至刻度，搖勻，備用。其濃度為1 mg/ml。

1.5 測定方法

分別取標準品溶液和供試品溶液盛裝于2 ml自動進樣瓶中，進行自動進樣（進樣量為20 ul），注入液相色譜儀，按外標法以峰面積計算供試品中谷氨酰胺的含量。

2 實驗結果

2.1 系統適用性試驗

在上述色譜條件下，取標準溶液進行自動進樣，連續進樣6針，谷氨酰胺峰與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5；理論板數、拖尾因子，6次色譜峰峰面積的相對標準偏差（RSD）、六次色譜峰的保留時間分別為：9.80、9.79、9.79、9.78、9.70、9.71，其相對標準偏差RSD=1.2%，小于2.0%；6次色譜峰面積分別為：1205488、10665、1200380、1204391、1170905、1186594，其相對標準偏差標準偏差（RSD）為1.2%小于5%；拖尾因子分別為：1.2、1.2、1.3、1.4、1.4、1.4，其相對標準偏差標準偏差（RSD）為0.7%均小于2%；理論塔板數分別為：4886、4867、5001、5185、5545、5867，均大于4000。

2.2 線性

用對照品制備不同濃度的樣品，使其濃度分別為0.5 mg/ml、0.75 mg/ml、1.0 mg/ml、1.25 mg/ml、1.5 mg/ml。每個濃度連續進樣3針。以檢測得到的峰面積平均值、濃度作線性回歸，其線性回歸方程為y=1188457x，其中y為峰面積，x為谷氨酰胺濃度（見圖1），線性相關系數R2為0.999。結果表明在目標濃度0.5 mg/ml～1.5 mg/ml內，該方法具有良好的線性關系。

2.3 準確度

分別制備濃度約為1 mg/ml的對照品溶液和濃度約為1 mg/ml的樣品溶液。分別吸取樣品溶液1 ml和標準溶液0.8 ml；樣品溶液1 ml和標準溶液1.0 ml；樣品溶液1 ml和標準溶液1.2 ml分別加入10 ml容量瓶中，用流動相稀釋定容至刻度，制備濃度分別為80%、100%、120%的三種濃度的混合溶液。每個濃度連續進樣三針，記錄實驗結果。實驗結果表明該方法在三個濃度下其回收率分別為99.5%、97.6%、97.9%。平均回收率達到98.3%，表明該測定方法具有較高的檢測準確度。

2.4 精密度

稱取標準品約250 mg，精密稱定于50 ml容量瓶中，用純化水稀釋并定容至刻度，搖勻，作為貯備液備用。再分別加標準貯備溶液0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml，用流動相稀釋定容至刻度，搖勻，制成濃度分別為80%、100%、120%的三種濃度，備用。每個濃度連續進樣三針，記錄色譜圖。實驗結果表明三個實驗下其相對標準偏差RSD分別為0.47%、0.42%、0.20%，平均相對標準偏差RSD=0.37%。該結果表明該方法重現性較好。

2.5 專一性

從圖2可以看出，用該方法可以較好的分離測定谷氨酰胺的相關物質如谷氨酸、焦谷氨酸等，具有專一性高的特點。

3 討論

本文建立的高效液相色譜法測定谷氨酰胺含量的方法，其檢測波長為215nm，流動相為0.05 mol/L的磷酸二氫鉀（用磷酸調節PH值為4.0）∶乙腈=70∶30，實驗結果表明該方法在其線性范圍內具有專一性高，檢測結果準確的特點。

高效液相色譜范文6

【Abstractobjective】TosetupamethodforqualitycontrolofFuyankangtablets.METHOD：HPLCmethodwasdevelopedtoquantitativedetermination.TheseparationwasperformedonAgilentTechnologiesZORBAXExtend-C184.6×250mm,5μm.Themobilephasewasacetonitrile-methanol-phosphatebuffer(pH=6.8)(16：16：68).Theflowratewas1.0ml·min-1.TheUVdetectionwavelengthwas220nm.Thecolumntemperaturewas30℃.RESULTS：ThelinearrangeofMatrineandOxgmatrinewereat0.02～0.40mg·ml-1(r=0.9995)and0.01～0.20mg·ml-1(r=0.9997)respectively,theaveragerecoveries(n=6)were98.2%and97.6%withRSD1.4%and2.2%.CONCLUSIONThemethodissimpleandaccurate,itcanbeusedforqualitycontrolofKangfulingcapsules.

【Keywords】HPLC；Kangfulingcapsules；Matrine；Oxgmatrine；Determination

康婦靈膠囊為《國家藥品監督管理局標準（試行）》收載的品種，由苦參、杠板歸、黃柏、益母草、雞血藤、紅花龍膽、土茯苓、當歸等8種中藥組成。具有清熱燥濕、活血化瘀、調經止帶的功效，為婦科常用中藥[1]?？鄥⒑锌鄥A、氧化苦參堿等成分，我們采用高效液相色譜法測定制劑中苦參堿、氧化苦參堿的含量，該項方法操作簡便、快速、準確可靠，可用于康婦靈膠囊的質量控制論文。

1儀器與試藥

1.1儀器LC-2010A高效液相色譜儀，CLASS-VP色譜工作站。

1.2試藥苦參堿對照品（批號：100078-200414），氧化苦參堿對照品（批號：110780-200004），由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用；康婦靈膠囊為市售樣品（貴州和仁堂藥業有限公司，規格：0.4g·粒－1，批號：20061108，20061202，20061216）。乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件與系統適用性試驗色譜柱：AgilentTechnologiesZORBAXExtend-C184.6×250mm，5μm，流動相：乙腈-甲醇-磷酸鹽緩沖液（PH6.8）（16:16:68），檢測波長：220nm，流速：1.0ml/min，柱溫：30℃。

2.2溶液配制

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取經五氧化二磷減壓干燥12小時以上的苦參堿對照品和氧化苦參堿對照品各適量，分別加甲醇制成每1ml各含0.4mg的對照品貯備液；再精密量取苦參堿對照品貯備液和氧化苦參堿對照品貯備液各適量，加甲醇制成每1ml含苦參堿0.2mg、氧化苦參堿0.1mg的混合溶液，作為對照品溶液。

2.2.2樣品溶液的制備取康婦靈膠囊10粒內容物，研細，取約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨溶液2ml使濕潤，再加三氯甲烷（CHCl3）30ml，超聲處理（功率250W，頻率33KH2）20分鐘，濾過，取濾液，再用三氯甲烷洗滌殘渣、容器及濾器4次，每次5ml，濾過，濾液合并，置水浴上蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3陰性對照溶液的制備取除苦參以外的處方中其余藥材的十分之一量，按法制成片，再按樣品制備方法，制成陰性對照溶液。

2.3專屬性試驗

分別精密吸取樣品溶液、陰性對照溶液及對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。由圖1可見，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，有相同保留時間（1氧化苦參堿：6.866min；2苦參堿：15.422min）的色譜峰，陰性試驗無干擾，證明本法可行。

2.4線性范圍考察

精密吸取對照品貯備液各適量，分別加甲醇配成濃度分別為苦參堿：0.02、0.05、0.10、0.20、0.30、0.40mg·ml－1，氧化苦參堿：0.01、0.03、0.05、0.10、0.15、0.20mg·ml－1的溶液，搖勻，濾過，精密吸取續濾液各10μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積（A）為縱坐標，其濃度（C）為橫坐標，線性回歸，苦參堿回歸方程為：A=4.34×105C＋3.87×102，r=0.9995；氧化苦參堿回歸方程為：A=1.21×104C＋8.07×102，r=0.9997。結果表明，苦參堿在0.02～0.04mg·ml－1范圍內峰面積與其濃度呈良好線性關系；氧化苦參堿在0.01～0.20mg·ml－1范圍內峰面積與其濃度呈良好線性關系。

2.5精密度

取樣品（貴州和仁堂藥業有限公司，批號：20061108）按“2.2樣品溶液的制備”方法制備樣品溶液，重復進樣5次，進樣量10μl，在上述色譜條件下求得苦參堿峰面積RSD為0.9%，氧化苦參堿峰面積RSD為1.2%，表明精密度較好。

2.6穩定性試驗

取樣品（貴州和仁堂藥業有限公司，批號：20061108）溶液，在0、2、4、8、24h分別進行測定。結果表明樣品溶液在24h內基本穩定，苦參堿峰面積

的RSD為1.1%，氧化苦參堿峰面積的RSD為0.8%。

2.7重復性試驗

取樣品（批號：20061108）共6份，分別按“2.2樣品溶液的制備”方法制備樣品溶液，進行測定，求得苦參堿含量的RSD為0.7%，氧化苦參堿含量的RSD為1.6%，表明重復性較好。

2.8加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品（貴州和仁堂藥業有限公司，批號：20061108，苦參堿含量3.01mg·g－1，氧化苦參堿含量2.42mg·g－1，平均裝量0.3916g·粒－1）適量，共6份，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入苦參堿對照品溶液（0.2001mg·ml－1）、氧化苦參堿對照品貯備液（0.1000mg·ml－1）各適量，揮去甲醇，按“2.2樣品溶液的制備“方法操作，得回收率試驗溶液，依法測定，結果見表1。

2.9樣品含量測定

分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定三批樣品中苦參堿、氧化苦參堿峰面積，按外標法計算其含量（n=5），結果見表2。根據三批樣品所測結果，暫定每?？祴D靈膠囊的苦參堿含量質控定量限為1.8mg，氧化苦參堿含量質控定量限為0.5mg。表1苦參堿、氧化苦參堿加樣回收率試驗表2三批樣品含量測定結果

3討論

3.1流動相的選擇筆者選擇了三種流動相：①乙腈-0.1%磷酸溶液（20:80）（三乙胺調節PH值至8.0）[2]；②乙腈-甲醇-磷酸鹽緩沖液（PH6.8）-三乙胺（18:18:70:0.1）[2]；③乙腈-甲醇-磷酸鹽緩沖液（PH6.8）（16:16:68）。經多次測試結果表明，前兩種流動相所得峰形較寬，含雜質多，而采用③乙腈-甲醇-磷酸鹽緩沖液（PH6.8）為流動相所得樣品峰形好，干擾成分少，故選此做為含量測定的流動相。

3.2溶劑的確定筆者比較了用甲醇溶解供試品及用流動相溶解供試品，結果以甲醇為溶劑分離效果好，且保留時間短。

3.3通過對3批樣品中苦參堿、氧化苦參堿的測定，結果表明苦參堿最高含量為1.38mg·粒－1，最低為1.18mg·粒－1；氧化苦參堿最高含量為1.08mg·粒－1，最低為0.94mg·粒－1。綜合考慮確定限量，每粒含苦參堿不得低于1.8mg，含氧化苦參堿不得低于0.5mg。

本方法結果準確，方法簡便，重現性及回收率均理想，可以有效地控制產品質量。

【參考文獻】